Prag Karl Üniversitesi, Karlova Üniversitesi ya da kısaca Prag Üniversitesi, Çekya'nın başkenti Prag'da bulunan bir devlet üniversitesidir. Çekya'nın en eski ve en büyük üniversitesi olan okul aynı zamanda Avrupa'nın en eski üniversitelerinden biridir.
Kutsal Roma İmparatoru olan IV. Karl tarafından 1348'de kuruldu. Latince olan eğitim dili 18. yüzyılda Almancayla değiştirildi. 19. yüzyılda üniversite Çek ve Alman üniversiteleri olmak üzere eğitim dili üzerine yaşanan tartışmalardan ötürü ikiye ayrıldı. II. Dünya Savaşı sonrasında sadece Çekçe eğitim veren üniversite devam etti.